酶标仪(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)是一种常用的生物化学分析技术,用于检测和测量样品中的特定物质(如蛋白质、抗原、抗体等)的存在和浓度。它的用途广泛,包括医学诊断、生物学研究、食品安全监测等领域。
酶标仪的工作原理基于酶的催化作用和免疫反应原理。下面是酶标仪的基本工作原理:
1. 固定:首先,在试验板或试管的表面上涂覆目标物质(如抗原或抗体)。这样,当样品中的特定物质与其相结合时,它们将被固定在试验板或试管的特定位置上。
2. 结合:接下来,将待测样品加入试验板或试管中,样品中的特定物质(如抗体)与固定在试验板上的目标物质(如抗原)发生特异性的结合。
3. 洗涤:为了去除未结合的物质,需要进行洗涤步骤。洗涤液通过试验板或试管,将未结合的物质洗掉,只留下特异性结合的物质。
4. 检测:然后,加入与待测物质特异性结合的酶标记反应物(如辣根过氧化物酶-HRP),它与特异性结合的物质结合在一起。
5. 底物添加:加入底物,底物被酶标记反应物催化,产生可测量的信号。常见的底物是类似于四氢吡啶-2-酮(TMB)的物质,它与HRP催化反应后会产生蓝色或黄色的产物。
6. 反应停止:在发生足够的颜色反应后,通过添加停止液(如硫酸或酸性溶液)停止酶催化反应。
7. 读取:*后,使用酶标仪测量反应产物的光密度或颜色。光密度或颜色的强度与待测物质的浓度成正比,通过与标准曲线对比,可以确定待测样品中目标物质的浓度。
总结起来,酶标仪通过特异性结合、酶催化和光密度或颜色测量等步骤,实现了对待测物质的检测和测量。它的工作原理简单而灵敏,使其成为许多生物学和医学领域中重要的实验技术。