酶标仪(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种常用的实验技术,用于检测和定量分析生物样品中特定分子的存在或浓度,如蛋白质、抗体、激素等。它主要基于酶与抗原或抗体之间的特异性结合反应来实现。
酶标仪的基本使用方法如下:
准备试剂和样品:根据实验的要求准备好所需的试剂和样品,包括酶标板、酶标板涂层物、抗原或抗体溶液、标准曲线样品和待测样品等。
酶标板涂层:将涂有特定抗原或抗体的酶标板孔进行涂层。涂层可以通过直接涂层法、间接涂层法或夹心法等不同的方法进行。
洗涤:用洗涤缓冲液洗涤酶标板,去除未结合的物质,以减少非特异性背景信号。
孵育:将待测样品和标准曲线样品加入酶标板的孔中,使其与涂层的抗原或抗体发生特异性结合反应。孵育时间和温度根据实验要求设定。
洗涤:再次用洗涤缓冲液洗涤酶标板,去除未结合的物质。
反应:加入特定的酶标记物(通常是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶),使其与待测样品中的目标物质结合。
洗涤:进行*后一次洗涤步骤,去除未结合的酶标记物。
反应停止:加入适当的反应停止液,使酶标记物的反应停止。
读取结果:使用酶标仪测量吸光度,根据标准曲线计算样品中目标物质的浓度。
需要注意的是,具体的酶标仪使用方法可能会因不同型号和品牌而有所差异,因此在进行实验前,应仔细阅读并按照仪器和试剂的说明书进行操作