使用酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺的操作方法

1、蒸馏水或去离子水

2、可吸取50ul和100ul的移液器及吸头

3、4000转离心机

4、吸水纸或相当的吸水材料

5、450nm的酶标仪

6、计时器

7、20mM PBS：需自行配制

8、清洗液：需自行配制

二、酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺试剂配制：

1、20mM PBS： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸馏水定容至1000ml

2、清 洗 液： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml 土温20

三、酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺样品的前处理：    鸡蛋（稀释倍数：5）

1、称1g混合好的全蛋，加入5ml的10%甲醇/20Mmpbs，震荡2min；

2、4000转离心5min；

3、取2ml 上清液加入2ml异辛烷：氯仿（2：3），混匀；

4、4000转离心5min，取上层150ul测定。

四、酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺的测定过程:

1. 将所有试剂和样品放回室温20-28℃，但时间不要超过24小时;

2. 从铝箔袋中取出所需数量的微孔条，固定在微孔板架上，将未使用的微孔条与干燥剂一起放入密封袋中存放;

3.用吸管将150ul标准品和样品吸入相应的微孔。确保每一种溶液都是用干净的吸管来绘制的，以避免交叉污染。加入每孔加入50ul三聚氰胺酶标记物;

4. 轻轻摇动盘子60秒，20-28摄氏度孵育30分钟;

5. 将微孔中的溶液倒入水槽中，将清洗液填满微孔，摇匀丢弃，重复三次，共四次清洗盘子;

6. 清洗一次后，将溶液倒进孔中，然后翻转微孔板，在吸水纸上轻拍干燥;

7. 每个微孔加入100ul底物溶液;

8. 20-28℃孵育30分钟;

9. 每个微孔加入100ul停止液;

10. 用莱恩德酶标仪在450nm下读板。